Is teicníc é PCR, nó imoibriú slabhrach polaiméire, a úsáidtear chun seichimh DNA a aimpliú.D'fhorbair Kary Mullis é den chéad uair sna 1980í, ar bronnadh Duais Nobel sa Cheimic air i 1993 as a chuid oibre.D'athraigh PCR bitheolaíocht mhóilíneach, rud a chuir ar chumas taighdeoirí DNA a mhéadú ó shamplaí beaga agus mionstaidéar a dhéanamh air.
Is próiseas trí chéim é PCR a tharlaíonn i dtimthriallóir teirmeach, meaisín a fhéadfaidh teocht meascán imoibrithe a athrú go tapa.Is iad na trí chéim ná dínádúrú, annealing, agus síneadh.
Sa chéad chéim, dínádúrú, téitear an DNA déshnáithe go teocht ard (timpeall 95°C de ghnáth) chun na naisc hidrigine a choinníonn an dá shnáithe le chéile a bhriseadh.Mar thoradh air seo tá dhá mhóilín DNA aon-shnáithe.
Sa dara céim, anáil, íslítear an teocht go dtí thart ar 55°C chun ligean do na primers anáil a dhéanamh chuig na seichimh chomhlántacha ar an DNA aonshnáithe.Píosaí gearra DNA is ea primers atá deartha chun na seichimh spéise ar an sprioc-DNA a mheaitseáil.
Sa tríú céim, síneadh, ardaítear an teocht go timpeall 72°C chun ligean don Taq polymerase (cineál DNA de pholaiméiráis) snáithe nua DNA a shintéisiú ó na primers.Díorthaítear an Taq polymerase ó bhaictéar a chónaíonn i spriongaí te agus atá in ann na teochtaí arda a úsáidtear i PCR a sheasamh.
Tar éis timthriall amháin PCR, is é an toradh ná dhá chóip den seicheamh DNA sprice.Trí na trí chéim a athrá ar feadh roinnt timthriallta (30-40 go hiondúil), is féidir líon na gcóipeanna den seicheamh DNA sprice a mhéadú go heaspónantúil.Ciallaíonn sé seo gur féidir fiú méid beag bídeach de DNA tosaigh a mhéadú chun na milliúin nó fiú na billiúin cóipeanna a tháirgeadh.
Tá go leor feidhmeanna ag PCR i dtaighde agus diagnóisic.Úsáidtear é sa ghéineolaíocht chun staidéar a dhéanamh ar fheidhm ghéinte agus sócháin, i bhfóiréinsic chun anailís a dhéanamh ar fhianaise DNA, i ndiagnóis galair thógálacha chun láithreacht pataiginí a bhrath, agus i ndiagnóis réamhbhreithe chun scagadh a dhéanamh le haghaidh neamhoird ghéiniteacha i bhféatas.
Tá PCR curtha in oiriúint freisin le húsáid i roinnt éagsúlachtaí, mar PCR cainníochtúil (qPCR), a cheadaíonn an méid DNA a thomhas agus PCR trascríobh droim ar ais (RT-PCR), ar féidir a úsáid chun seichimh RNA a aimpliú.
In ainneoin a iliomad feidhmchlár, tá teorainneacha ag PCR.Éilíonn sé eolas ar an seicheamh sprice agus dearadh na primers cuí, agus is féidir go mbeadh earráid ann mura ndéantar na coinníollacha imoibrithe a bharrfheabhsú i gceart.Mar sin féin, le dearadh turgnamhach cúramach agus le cur i gcrích, tá PCR fós ar cheann de na huirlisí is cumhachtaí sa bhitheolaíocht mhóilíneach.
Am poist: Feabhra-22-2023